樹脂の完全な膨潤
2.0 g のブランク Wang レジンを清潔で乾燥した反応チューブに入れて秤量し、15 mL の DMF を加え、室温で約 30 分間活性化します。
最初のアミノ酸を取る
室温で、前のステップからの溶媒を砂中子で濾過し、1 mmolの5モル過剰のC末端アミノ酸、5倍モル過剰のDMAP、5モル過剰のDIC、DMFを加え、溶媒室温で3時間反応させる。反応が完了した後に使用します。DMF 洗浄を 4 ～ 6 回、毎回 5 ～ 6 回行います。次に、適量のピリジンと無水酢酸を体積比 1:1 で加え、30 分間反応させます。反応が完了した後に使用します。DMF 洗浄を 4 ～ 6 回、毎回 5 ～ 6 回行います。 (効果: 未反応の空の樹脂上のアクティブなマイクロドットをブロックします。)
Fmoc 保護団体の離脱
前のステップからの溶媒を吸引濾過によって除去し、10 mL の 20% ピペリジン DMF を加えます。 溶液を樹脂に加えます。N2 で 10 分間撹拌します。 最後に、溶液を濾過し、10 mL の 20% ピペリジン DMF 溶液を加えます。N2 を吹き込み、5 分間撹拌します。 次に、溶液を濾過し、この操作を 2 回繰り返します。 DMF で 4 回洗浄し、メタノールで 2 回、毎回 5 ～ 6 回洗浄します。
ニンヒドリンの除去効果を試験
少量の樹脂を取り出し、メタノールで 3 回洗浄し、ニンヒドリン、KCN を加え、フェノール溶液を各 1 滴、105 度～110 度で 5 分間加熱します。濃い青色に変わると陽性反応となり、除去が完了し、次の反応ステップを実行できることを示します。無色の場合は保護基が完全に除去されていないことを意味するため、上記の脱保護操作を繰り返す必要があります。
次に、2番目のアミノ酸とFmoc保護基を除去します。
3 倍モル過剰の C、末端の 2 番目のアミノ酸、3 倍モル過剰の HBTU、および 3 倍モル過剰の HOBT を秤量します。反応チューブに、適量の DMF を加えます。溶液が完全に溶解した後、10 倍モル過剰の (純粋な) DIEA を加えます。室温で 40 分間反応させ、DMF を使用します。4 ～ 6 回、毎回 5 ～ 6 回洗浄します。少量の樹脂を使用します。ニンヒドリン検出試薬でテストすると、無色になります。その後、20% ピペリジン DMF 溶液を 10 mL 加えます。Fmoc を除去します。これを 10 分間、5 分間 2 回行い、使用後 DMF 洗浄を 4 回、メタノールで 2 回、毎回 5 ～ 6 回洗浄します。少量の樹脂を取り出し、ニンヒドリン検出試薬を用いて検出します。検出が青色の場合は、反応の次のステップに進むことができます。
同様に、合成が N になるまでステップ 2.6 を繰り返します。Fmoc Protect 塩基の末端にある最後のアミノ酸を削除し、排出します。
樹脂の脱落と純粋な生成物の分離と検出
最後に、トリフルオロ酢酸切断溶液（９５％ＴＦＡ：２％ＴＩＳ：２％ＥＤＴ：１％Ｈ２Ｏ）を使用して２時間切断し、反応溶液を吸引濾過し、ポリペプチドのトリフルオロ酢酸溶液を得る。ライセートを窒素でできるだけ乾燥させ、エーテルで沈殿させ、遠心分離し、エーテルで 3 秒間洗浄します。約５回繰り返すと、白色固体が得られた。純水に溶解後、HPLC で脱塩精製し、凍結乾燥して結晶を析出させ、少量の MS 分析を行います。