ポリペプチドの溶解
各アミノ酸には固有の化学的特性があり、ペプチドの溶解度はその配列と修飾に依存します。すべてのペプチドを溶解する前に、溶解度テストのために少量のペプチドを採取することをお勧めします。
ペプチドの溶解は非常に重要なステップです。可溶化が不適切であると、ペプチドの損失や実験の失敗が生じる可能性があります。ペプチドの溶解性は主にペプチドの配列に依存するため、ペプチドを設計する際には注意が必要です。溶解性を高めるために、ペプチド配列には 20% の荷電残基が含まれることが推奨されます。
使用前に、お客様は次の 3 つの基本原則に従って、ペプチドを溶解する適切な溶媒を選択できます。
まず、選択した溶媒はペプチドを完全に溶解できなければなりません。第二に、選択した溶媒は実験条件に適合する必要があります。最後に、選択した溶媒はペプチドと反応したり分解したりしてはなりません。
ペプチドの量が許す限り、最初にペプチドの少量を溶解し、次にサンプル全体を溶解することができます。溶媒からペプチドを回収する必要がある場合は、凍結乾燥後に除去しやすい初期溶媒を選択できます。
以下の提案はペプチドを溶解するのに役立ちます。
5 アミノ酸未満のペプチドは一般に水溶液に可溶であり、疎水性の強いアミノ酸 (W、I、L、F、M、V、Y) を除きます。
If the charged amino acids are evenly distributed throughout the sequence, then contains >親水性ペプチドの荷電アミノ酸（E、D、K、R、H）を25％含有<25%Peptides with hydrophobic amino acids are generally soluble in aqueous solutions. The purification system for peptides is generally 0.1% TFA/Water and 0.1% TFA/ ACN. Therefore, if the peptide is dissolved in a buffer with no or very weak buffering capacity, the result may be an acidic peptide solution. When using other methods to dissolve peptides, be sure to use a solvent that is pH The value is nearly neutral. acidic peptide (E+D The number of residues is more than K+R+H number of residues) and basic peptides (K+R+H The number of residues is more than E+D number of residues) in neutral pH value conditions than in acidic pH value is easier to dissolve.
For hydrophobic amino acid content is 50% ～75%peptide, even if the sequence contains >25%荷電アミノ酸も水に不溶性または部分的に可溶性である可能性があります。最初に、DMF、ACN、イソプロピルアルコール、エタノール、酢酸、4 ～ 8 M GdnHCl、尿素、または DMSO (C、W、M の順序ではない) および他の同様の有機溶媒などの最小限の量の強力な有機溶媒にペプチドを溶解することが最善です。ペプチドを溶解する有機溶媒を水溶液に一滴ずつゆっくりと加えるのが最善です。溶液が濁った場合は溶解限界に達している可能性があり、そのまま溶解し続けても意味がありません。最初に選択した溶媒は実験系と適合する必要があることに注意してください。
Hydrophobic amino acid content >75% 疎水性の強いペプチドは、一般に水溶液にも不溶です。このようなペプチドは、最初に強い有機溶媒 (TFA、ギ酸など) で処理する必要があります。水溶液に添加すると溶解し、沈殿する可能性もあります。最終的なペプチド溶液を変性するには高濃度の有機溶媒が必要になる場合がありますが、有機溶媒は一般に生細胞での生物学的機能の研究には使用されません。
S, T, E, D, K, R, H, N, Q, Y High content (>75%) ポリペプチド配列は、冗長な分子間水素結合ネットワークを形成する傾向があり、濃縮水溶液中でゲルを容易に形成します。このようなペプチドは、ステップ 3 で説明したように可溶化できます。溶解中に起こり得る問題を軽減するために、ペプチドの溶解性を向上させるための設計と配列にさらに注意を払うことをお勧めします。